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人肝癌HepG2细胞株、RPMI 1640培养液、小牛血清、噻唑蓝(MTT)、吉西他滨(GEM)、人参皂甙20(R)-GS-Rg3、鼠抗人VEGF单克隆抗体、羊抗鼠辣根过氧化物酶标记的二抗、SP免疫组化试剂盒、流式细胞仪等。人肝癌HepG2细胞接种于100ml玻璃培养瓶中，在含体积分数100ml/L新生小牛血清RPMI 1640培养基中贴壁生长，于37℃、50ml CO₂饱和温度培养箱中培养。细胞贴壁生长，每2－3d传代一次。取对数生长期细胞进行实验。

共分为4组，根据文献资料及预试验结果分组如下：GS-Rg3(R组)，包括R1、R2、R3、R4和R5共5个浓度点，其在培养液中的终浓度分别为12.5、25、50、100、200μmol /L。吉西他滨组(G组)，包括G1、G2、G3、G4和G5共5个浓度点，其在培养液中的终浓度分别为1.25、2.5、5.0、10.0、20.0mg/L。联合用药组(L组)，以相应的GS-Rg3浓度和吉西他滨浓度联合应用。空白对照组(O组)，不加药，以等量的培养液代替。

MTT法检测细胞活性、流式细胞仪检测细胞凋亡、免疫细胞化学检测加药前后VEGF的表达。

结果以`x±s表示，采用SPSS 16.0统计软件进行独立样本t检验及单因素方差分析，P＜0.05有统计学意义。

1 不同药物对HepG2细胞株的抑制作用

GS-Rg3、GEM以及两药联合，三组分别对肝癌HepG2细胞作用24h、48h后的细胞增殖抑制率进行比较。结果表明：无论在同一时间点不同浓度，还是在不同时间点同一浓度对HepG2细胞增殖抑制率不同，随浓度升高，随着时间的延长，增殖抑制逐渐升高；GS-Rg3与GEM联合组对细胞生长抑制率高于单药组；上述结果有统计学差异（P＜0.05，表1-2）。

2 不同药物对HepG2细胞凋亡的影响

采用Annexin V/PI双染法，应用流式细胞仪检测各组药物分别作用HepG2细胞48h后其凋亡情况，发现两个单药处理组对人肝癌HepG2细胞株的早期和晚期凋亡率均高于空白对照组，差异具有统计学意义（P＜0.05）；药物联合组诱导凋亡能力高于两个单药处理组，差异具有统计学意义（P＜0.05）。

3 GS-Rg3作用前后HepG2细胞中VEGF表达的比较

正常VEGF主要在细胞质表达，呈棕黄色均匀染色为阳性表达(图2)。对VEGF表达阳性的样本行图像分析，测其灰度值作为其表达强度的量化指标。灰度值与实际表达强度成反比，即灰度值越低，阳性表达越强；灰度值越高，阳性表达越弱。VEGF在GS-Rg3及药物联合组作用48h后表达均降低，与阴性对照相比均具有统计学差异（P＜0.05）；与GS-Rg3组相比，药物联合组VEGF表达下降更明显，两者差异具有统计学意义（P＜0.05），见表3。

本研究证明了GS-Rg3与GEM联合对人肝癌HepG2细胞株具有协同抑制作用，亦可诱导人肝癌HepG2细胞株发生凋亡，可能是通过抑制VEGF的表达发挥抗肿瘤作用。