细胞疗法在未来医学中展现出巨大的潜力。然而，如何高效且经济地生产足够数量的高质量治疗性细胞，以满足日益增长的临床需求，仍然是一个关键挑战。对于贴壁细胞，如间充质干细胞 (MSC)，传统的规模化生产通常依赖于生物反应器。尽管该方法具有较高的生产效率和成本效益，但可能对细胞造成不利的机械应激。相比之下，静态培养系统（如培养瓶和多层培养器）虽然能够获得更高质量的细胞，但其生产效率低下、成本高昂且难以实现大规模生产。因此，迫切需要一种能够结合静态培养的细胞质量优势和生物反应器生产效率的新型方法。突破性的FlexiGrow™静态培养解决方案足以应对CGT领域的艰巨挑战，提供更高的细胞产量和更低的生产成本。

Carroucell专注于创新型微载体的研发。与市面上常见的球形微载体不同，Carroucell开发了独特的扁平微载体FlexiGrow™。这种创新的几何形状能够显著改善细胞附着，降低细胞聚集相关的死亡率，快速、低成本、无缝提升细胞产量1-5倍。FlexiGrow™是全球首款专为静态培养环境设计的微载体，适用所有贴壁细胞（如MSC、iPSC、HEK293、VERO、角质形成细胞、成纤维细胞等）的研发和GMP规模化生产。

与BioLamina的重组人层粘连蛋白LN521涂层结合，FlexiGrow微载体通过模拟自然细胞-基质相互作用，进一步提升MSC的附着、存活和增殖，为高质量细胞生产提供支持。

1. 实验设计思路

本实验旨在探索并优化一种利用LN521涂层和FlexiGrow™微载体的两步静态培养方案，以显著提高MSC的扩增效率和细胞质量。实验的核心思路是：

第一步：在LN521涂层的培养瓶中进行初始MSC扩增。LN521能够促进MSC的快速附着、存活和增殖，为后续在微载体上的大规模扩增奠定高质量的细胞基础。

第二步：将第一步扩增获得的MSC转移至补充了LN521涂层FlexiGrow™微载体的同一培养瓶中进行大规模扩增。FlexiGrow™微载体在静态培养系统中提供巨大的额外附着表面，从而在有限的空间内实现细胞数量的显著提升。

通过这种两步策略，旨在结合LN521在初始培养阶段对MSC生长和维持的促进作用，以及 FlexiGrow™微载体在大规模扩增阶段提供的巨大表面积优势，最终实现高质量MSC的高效生产。

2. 实验材料

微载体：FlexiGrow™微载体（涂层与未涂层）。

涂层：BioLamina的LN521（浓度5μg/mL）。

细胞：人类皮下脂肪来源MSC（批次SK0595，CTI Biotech）。

培养基：α-MEM+5%人源供体血小板裂解液+100单位/mL青霉素+100μg/mL链霉素

3. 实验步骤

1. 第一步扩增

-将750,000个年轻的第3代 MSC接种到预先用6mL LN521溶液涂布的T75培养瓶中。

-在15 mL无异种成分培养基（1）中培养4天，直至细胞达到汇合。

-收获并量化培养瓶中的总细胞数量，并评估细胞活力。

2. 第二步扩增

-将第一步收获的所有MSC重新接种到同一个T75培养瓶中。

-向培养瓶中加入30mL新鲜的无异种成分培养基（1）和57mg的LN521涂层 FlexiGrow™微载体（细胞与微载体的比例为每10⁶个细胞使用25mg微载体）。

-在微载体上培养5天，直至细胞再次达到汇合。

-使用胰蛋白酶消化收获细胞，并通过过滤分离微载体。

-使用自动细胞计数器确定最终的细胞数量和活力。

4. 实验结果分析

实验结果（如上图所示）表明，与仅在LN521涂层的T75培养瓶中培养4天相比，在随后的5天内，通过添加LN521涂层的FlexiGrow™微载体进行培养，MSC的总产量显著提高了 3.45倍。具体来说：

第一步扩增后，在LN521涂层的T75培养瓶中获得了2.25 × 10⁶（±160,000）个MSC，细胞活力为81.6%。

在第二步扩增后，在同一个T75培养瓶中，通过使用LN521涂层的FlexiGrow™微载体培养，最终收获了7.76 × 10⁶（±795,000）个MSC，细胞活力高达92.4%。

这些结果清晰地证实了这种两步培养策略的有效性。FlexiGrow™微载体为MSC提供了额外的生长表面，而不会影响细胞的初始生长。更重要的是，LN521涂层在培养的第一阶段有助于启动、选择和维持处于生长阶段的MSC，从而促进了在引入微载体后的快速高效生长启动，最终实现了高质量细胞的高效生产。这充分证明了LN521涂层与FlexiGrow™微载体上优化的培养方案之间的协同效应。

V. 结论：新一代培养方案对大规模生产高质量MSC的影响，迈向贴壁细胞疗法的普及

Carroucell和BioLamina通过开发这种完整且优化的细胞生产工艺，有望显著提高MSC和其他贴壁细胞的生物生产效率（如下图所示）。与传统的静态培养方法相比，该创新协议能够显著减少细胞生产所需的空间、人力和耗材，同时维持或提高细胞质量。此外，该技术无需进行昂贵的新设备投资或开发新的复杂工艺，从而进一步降低了总体成本。通过将LN521 涂层与FlexiGrow™微载体相结合，该方案为大规模、经济高效地生产高质量MSC提供了一个强有力的工具，有望加速细胞疗法的发展并使其更广泛地惠及患者。

FlexiGrow™微载体是全球首款专为贴壁细胞在静态环境中扩增而设计，助力原代细胞培养更高效、更温和、更可控，彻底革新您的细胞培养工艺，带来前所未有的优势：

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- 成本优化：大幅减少培养所需的时间、空间和耗材，无需昂贵的新设备投入，显著降低您的总体培养成本，让您的产品更有成本优势。

- GMP合规：通过cGMP认证，无动物源成分，伽马射线灭菌，多重包装，提供GMP合规文件，包含内毒素证书，灭菌证书，可浸出物证书，稳定性报告等。

- 易于监控：透明设计便于实时观察细胞附着和生长状态。

- 适合所有贴壁细胞：包括MSC、iPSC、肿瘤细胞、HEK293、VERO、角质形成细胞、成纤维细胞等。

- 轻松集成到各种静态培养系统：如培养瓶、WAVE、CellFactory、HYPERFlask、CELLdisc、CellSTACK等。

- 适用于科研实验、临床前研究、工艺优化以及GMP规模化生产。

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